筛好的引物突然没多态了
事先筛选引物在亲本之前是有多态性的,可是过一阵子用同样的引物,同样亲本DNA,就没有多态了。这个现象是为什么呢?不是所有的引物都出问题,是个别的,我自己分析原因会不会是引物本身由于外界环境的影响(比如温度,PH,浓度等)造成引物形成二聚体,或者形成回文结构? 求高手指点
一般来说,引物和模板都是DNA,在-20摄氏度下不会有问题。再说,引物设计的时候一般是不会有相互配对或自配的情况,所以形成二聚体或回文结构的可能性不大。你可以把引物序列发个我,我帮你分析一下。我觉得你这个问题很可能是体系的问题,建议你把缓冲液、酶什么的都换新鲜的。还有,操作过程中要尽量保持低温,避免过于剧烈的震荡,混匀即可。
答:一般来说,引物和模板都是DNA,在-20摄氏度下不会有问题。再说,引物设计的时候一般是不会有相互配对或自配的情况,所以形成二聚体或回文结构的可能性不大。你可以把...详情>>