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2018-06-24 15:00:35

•   血清清蛋白与血浆γ-球蛋白的分离定量纯化和鉴定  实验设计  班级：11级口腔本科2班  姓名：段康博        学号：201150166       陈晓红              201150167       章瑞雪              201150163       郭昌再              201150145       高原               201150143  【实验目的】  1。
     了解并基本掌握蛋白质分离提纯的过程  2。 从血清中分离并纯化血清清蛋白和γ-球蛋白。 3。 进行血清清蛋白和γ-球蛋白的定量和鉴定 4。  4。掌握电泳的原理方法及应用  【实验原理】  血浆蛋白是血浆中最主要的固体成分，血浆蛋白质种类繁多，功能各异。
    用不同的分离方法可将血浆蛋白质分为不同的种类。在生物化学研究中，由于它们所带电荷不同、相对分子质量不同，在高浓度盐溶液中的溶解度不同，因此可利用它们在中性盐溶液中溶解度的差异而进行沉淀分离，用盐析法将血浆蛋白分为白蛋白（即清蛋白）、球蛋白与纤维蛋白原三大类。
    用盐析法分离而得的蛋白质含有大量的硫酸铵，会妨碍蛋白质的进一步纯化，因此必须去除，常用的有透析法、凝胶过滤法等。本实验采用凝胶过滤法。脱盐后的蛋白质溶液再经DEAE纤维素层析柱进一步纯化。DEAE纤维素为阴离子交换剂，在pH 6。5的条件下带有正电荷，能吸附带负电荷的α-球蛋白和β-球蛋白（pl分别为4。
    9、5。06和5。12），而γ-球蛋白（pl7。3）在此条件下带正电荷，不被吸附故直接从层析柱流出，此时收集的流出液即为纯化的γ-球蛋白。提高醋酸铵溶液的浓度到0。06 mol/L，DEAE纤维素层析柱上的ß-球蛋白及部分a-球蛋白可被洗脱下来。
    将醋酸铵溶液的浓度提高至0。3mol/L，则清蛋白被洗脱下来，此时收集的流出液即为较纯的清蛋白。经DEAE纤维素阴离子交换柱纯化的清蛋白、γ－球蛋白液往往体积较大，样品质量分数较低。为便于鉴定，常需浓缩。浓缩的方法很多，本实验选用聚乙二醇透析浓缩的方法。
    血清清蛋白、γ-球蛋白分离纯化后，选用醋酸纤维薄膜电泳法鉴定其纯度。然后，用醋酸纤维素薄膜电泳可分为五个区带，γ-球蛋白的等电点为7。3，在pH8。6的巴比妥缓冲液中，带的负电荷最少，因此在电场中比其它蛋白质移动速度慢。而清蛋白等其它蛋白质的等电点均小于7。
    3（pl分别为4。9、5。06和5。12），因此在电场中比γ- 球蛋白移动速度快。（此处插图）饱和度的硫酸铵溶液沉淀的球状蛋白质。血清白 蛋白在血液中有重要生理功能，和维持血液正常渗透压有关，是血液总渗透压的主要调节物质。血清白蛋白的另一作用是作为脂肪酸的载体参与运送脂肪酸。
    γ-球蛋白又称免疫球蛋。

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  用***

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