牛舌菌菌种按以下制备：(1) 牛舌菌种源可以采集野生牛舌菌子实体，通过组织 分离法获得，也可向科研部门引进母种转管扩接。(2) 母种培育母种常用培养基配方有以下两种。配方1:马铃薯(去皮)200克，葡萄糖20克，磷酸二氢钾 3克，硫酸镁1。 5克，维生素BJ0毫克，琼脂20克，水1000 毫升，pH 5。
8-6。 2。配方2:马铃薯（去皮）200克，葡萄糖（或蔗糖）20克，玉 米粉30克,黄豆粉10克,酵母膏2克，磷酸二氢钾1。 5克，硫 酸镁0。5克，琼脂20克，水1000毫升。配制按常规装管、灭菌。冷却，排成试管斜面。(3) 转管扩接牛舌菌无论自己分离获得的母种，或是 从其他制种单位引进的母种,均因数量有限，不能满足生产上 的需求。
因此,一般对分离获得的一代母种，都要进行扩大繁 殖，即选择菌丝粗壮、生长旺盛、颜色纯正、无感染杂菌的牛舌菌试管母种，进行转管扩接，以增加母种数量。母代母种标明代号为“P”，再经提纯扩大分离，培养成的 母种，称为子代母种，其标名代号“F”。应按照扩大次数而分 别称为第一代子代母种或第二代子代母种。
标名代数在“F” 右下写上阿拉伯数字，如F,、F2、F3等。每支母代母种可扩接 30-40支子代母种。生产上供应的多为子代母种，它可以进 行再次转管扩接，一般每支可扩接20-25支，但转管次数不 应过多。因为菌种转管次数太多，菌种长期处于营养生理状 态，生命繁衍受到抑制，势必导致菌丝生活力下降，营养生长期缩短，子实体变小，肉薄，朵小，影响产量和品质。
因此母种 转管扩接一般3次为适，最多不得超过5次。接种后，置26°C左右培养，8-12天菌丝长满斜面即为子 代母种。菌丝初为白色或浅黄色,后转浅红色至朱红色，最后 变为红褐色。
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