如何.凝胶色谱操作?
如何.凝胶色谱操作?
(1) 凝胶色谱柱的装填:装填前,凝 胶用蒸馏水或洗脱液充分溶胀,配成凝 胶悬浮液。然后在与色谱柱下端连接的 尼龙管打开的情况下,将凝胶悬浮液一 次性缓慢倒入色谱柱内。装填时,要均 匀,不留气泡,如果发现气泡,必须重装。 装填完后,用300 mL 20 mmol/L的磷酸 缓冲液充分洗涤平衡凝胶12小时,使其 装填紧密。 (2) 样品的加入和洗脱:加样前,打 开下端口,使柱内缓冲液缓慢下降到与 凝胶面平齐,关闭出口。用吸管将透析 样品加到顶端,不要破坏凝胶面,打开下 觸出口,使其深入凝胶层后再关闭。小 心地加入20 mm〇l/L的磷酸缓冲液并进 行洗脱,当红色的蛋白质接近色谱柱底 端时,用试管收集。
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