菌种按常规接种后放在干燥、遮光、恒温环境中培养。室内温度以20C〜24°C为适，不宜超过30°C，不低于8°C。松 茸母种分离后20天左右，菌丝萌发出纯白色绒毛状的菌丝， 70天左右长成3〜5。 5厘米直径的菌落。松茸母种识别，在PDA培养基上，松茸菌丝为纯白色，菌落表面气生菌丝扭结，形成毛刺状。
  母种因基质配方不同 菌丝表现有差异。当蛋白胨含量为0。1%，菌丝仍为纯白色， 菌落表面气生菌丝呈绒毛状，且不发生扭结。当蛋白胨含量为0。2%，菌落中央明显隆起，呈草帽状；表面气生菌丝长而多分枝，且旺盛致密。随着蛋白胨含量的增加，菌落中央隆起 越高，草帽状菌落外沿越来越窄，隆起部位颜色越来越深，气生菌丝逐渐变短。
  当蛋白胨含量达1。6%时，菌落呈半球形， 颜色为浅黄褐色，组织化程度髙，酷似松茸菌盖，半球直径可达15〜20毫米。解剖观察,质地致密多汁，有浓郁的松茸香 味。松茸采用孢子分离后得到的菌种，其变异很大。其原因 是由于单孢子是不出菇的，在多孢菌落中，不亲和、不交配和 不孕菌丝大量存在，并与结实性菌丝交织混杂，挑选菌丝时的盲目性和风险性很大，常有栽培后不出菇或出菇率下降等现 象。
  解决这一现象的方法有二：一是做好尖端菌丝的反复提纯工作;二是进行多次的出菇鉴定。对外地引进菌种，也有做出菇鉴定的必要。松茸菌种分离和鉴定较难。I960年，日本学者富永保人在 对松茸进行组织分离时得到两种菌株。一种菌株的菌丝生长较慢，认为是松茸菌丝;另一种菌株的菌丝生长迅速认为是被 孢霉，但未提出依据。
  而后，各地在对松茸组织分离时，发现“快生型”菌株与松茸发生地层土壤中居多的葡萄酒色被孢霉 指纹图对应相同，可确认不是松茸菌株，从而为松茸菌种鉴定提供了科学的依据和方法。此外,对其组织分离出现两种不同 菌株的原因进行了探讨。多次分离对比实验显示，利用菌褶和菌盖部位菌肉为分离材料，所获得的菌株全部为松茸菌株;而 用菌柄基部组织为分离材料，时而出现葡萄酒色被孢霉。
  松茸的人工栽培需要批量生产纯菌种，设计和制备适宜 的培养基，并合成菌根。实验室条件下虽然成功地分离出松 茸纯菌种，但因为菌丝生长缓慢，难以实现菌种的批量生产。这还有待广大科研人员致力攻关，突破菌种生产技术“瓶颈”。