除禁行车辆外，长江隧道是24小时通行的。
本地蓝牌货车早7点至9点、晚5点至7点禁止进入长江隧道。
需要特别注意的是长江隧道每年会有夜间全封闭管养的时间，具体封闭管养时间每年由南京公安按实际情况规定。
南京长江隧道允许通行的车型为：
固定公交线路、19座以下客车、本地大客车、货物捆扎结实的本地蓝牌货车(早7点至9点、晚5点至7点除外)，禁止其他一切车辆、非机动车和行人通行。
隧道内限速80公里/小时，限高3.8米。
上海长江隧道货车通行时间
长江隧道的通行时间由过去的6：00-12：00延长至5：00-次日1：00，以进一步吸引车流，减轻长江大桥交通压力，并为过江的货车提供方便。
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