高压灭菌操作方法将料瓶装入灭菌层架上，送入灭菌柜内。或者直接装入灭菌锅内，料瓶直立放置或者横卧排放，不可倒置排放。关闭好锅盖。通入蒸汽，或者直接加热烧开锅内水产生蒸汽（因灭菌锅结构而异）。当压力上升到0.05兆帕时，停止通入蒸汽，打开排气阀门排出锅内气体。排气结束后，关闭阀门，再通入蒸汽。当压力又上升到0.05兆帕时，再排气一次。如此排两次气的目的是为了排除锅内冷空气，防止出现假压现象。然后继续通入蒸汽，或加热烧开锅内水。当压力上升到0.15兆帕时，即当安全阀自动排气时，开始计时，在此压力下保持1.5~2小时。灭菌结束后，停止通入蒸汽，缓慢打开排气阀门排气。当气体被完全排出后，即压力表指针回到时，打开锅盖，取出料瓶。当料瓶冷却至30℃以下时，移到接种箱内或接种室内进行接种。
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