第一部分DNA酶处理：试剂为PROMEGA( RQ1 RNase-Free DNase )
目的：失活DNase酶
RNA（TE洗脱）8微升
RQ1 RNase-Free DNase 10X Reaction Buffer 1微升
RQ1 RNase-Free DNase 1微升/微克RNA
合计10微升
37℃ 30分钟孵育
加1微升的RQ1 DNase 终止液
65℃ 10分钟使DNase酶失活
（PS：经验这一步最好在核酸提取之前就处理好，具体步骤如下：取样本反复冻融三次，然后一万转离心十分钟，取上清，用0.22微米的滤膜过滤，加DNase，提核酸）
第二部分RNA-seq system V2(cat.7102)
目的：生成并纯化cDNA
一、第一链合成
1、 融解第一链cDNA合成试剂（蓝色盖）和无核酸酶的水（绿色）
2、 短时离心A3ver1 放在冰上，votex A1Ver4和A2ver3，离心后放在冰上无核酸酶水放在室温
3、 在冰上，取2ul A1和5ul total RNA （500pg到100ng）放在0.2mlPCR管里
4、 将PCR管放在PCR仪中运行程序1：
RNA量≤ 1ng时，65℃ 2min，4℃存放
RNA量> 1ng时，65℃ 5min，4℃存放
5、 PCR仪降到4℃后取出PCR管放在冰上，加入制备好的第一链合成试剂，每个样本加入3ul，混匀后，离心放在冰上：
第一链合成试剂：2.5ul buffer mixA2+ 0.5ul 酶混合液A3（共3ul）注意：加酶A3时要慢慢加入，反复吹打枪头至少5次确保酶加入进去
6、 把加入第一链合成剂和样本的PCR管放在PCR仪上运行程序2：
4℃ 1min，25℃ 10min，42℃ 10min，70℃ 15min，4℃hold
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