Fries(1987)曾指出，红菇属孢子在一般条件下，包括在能够组织分离红菇菌丝的培养基上均不能萌发，并揭示能引 发孢子萌发的活化因子有三类，外源微生物中酵母（尤其是红酵母）、孢子自体菌丝体和宿主植物根系浸出物。刘斌曾从红 菇的分离及其培养特征观察发现，正红菇菌丝可用PDA加 富培养基，蔡小玲等开展野生红菇的分离培养试验，PDA + 腐殖土培养基，通过正红菇子实体组织分离技术获得，并用该 培养基扩大培养和菌种保存。
  随着红菇驯化研发技术的深 入，目前红菇纯菌种分离技术已被人们掌握。(1) 适用培养基这里介绍两种配方。配方1:马铃薯250克(取其提取液800毫升），红菇产地 腐殖土 300克(加水400毫升，煮沸20分钟，冷却后取澄清液 200毫升），白糖25克，维生素氏10毫克，琼脂23克。
  按常 规调料煮沸，装管、灭菌后制成斜面。配方2:鲜松针100克(水煮过滤），麦芽汁（即84毫升水 + 16克糖)100毫升，磷酸二氢钾0。2%，硫酸镁0。15%，葡萄 糖2%，维生素B, 10毫克，琼脂2%,补水至1000毫升，pH 5 〜5。
   5,灭菌后制成斜面。(2) 种菇分离部位红菇菌肉的生殖菌丝是由球状胞(孢 囊状菌丝）组成，埋在管状联络菌丝的基质中，再生能力较低，如采用以菌盖的菌肉作为分离材料成功率低。因此红菇分离 部位应选取菌柄中间的组织块。组织分离法属无性繁殖法。它是利用红菇菌柄的组织块，在适宜的培养基和生长条件下分离、培育纯菌丝的一种简 便方法。
  具有较强的再生能力和保持亲本种性的能力。这种 分离法操作容易，不易发生变异。但如果菇体染病，用此法得到的菌丝容易退化;若种菇太大、太老，此法得到的菌丝成活 率也很低。(3) 分离操作技术规程① 灭菌消毒切去菇体基部的杂质，放入0。1%升汞溶 液中浸泡1〜2分钟，取出用无菌水冲洗2〜3次，再用无菌纱布擦干。
  ② 切取种块将经过处理的种菇及分离时用的器具，同时放入接种箱内，取一玻璃器皿，将3〜5克髙锰酸钾放人其 中，再倒人8〜10毫升甲醛，熏蒸30分钟后进行操作。或用 气雾消毒剂灭菌。然后用手术刀把种菇纵剖为两半，在菌柄正中用刀切成3毫米见方的组织块，用接种针挑取，并迅速放 入试管中，立即塞好棉塞。
  
  ③ 接种培养将接入组织块的试管，置于24°C条件下恒 温培养3天，菌丝开始萌发，经多次提纯，即可获得红菇母种。 红菇菌丝长速较慢，接种10天后日平均长速为0。 67厘米，在 PDA培养基上菌丝外观白色至黄色，气生菌丝稀少，出现黄 棕色素。10天后通过筛选，挑出菌丝发育快的试管继续培 养，对污染有杂菌和长势弱的淘汰，经过20〜25天的培养，菌 丝才长满试管。