禽流感病毒如何进行分离和鉴定的?
禽流感病毒如何进行分离和鉴定的?
禽流感病毒的分离和鉴定如下: (1)采样用的物品(棉拭子、试管、脑心浸液及其培养基) 均须经灭菌处理。采集气管或泄殖腔样品可用棉拭子。组织 或器官样品可预先研磨制成10%悬液,低速离心,取上清液 作为送检或试验样品。为防止细菌污染应加人以下抗生素; 青霉素2万单位(IU)、链霉素1万单位(IU)、两性霉素B 10 微克(Jig)、卡那霉素1000微克或泰乐菌素300微克(每毫升 95 培养基中所含)。
(2)每1份处理好的病料样品接种9 ~ 11日龄鸡胚4枚。 以尿囊腔途径接种0。3毫升,37度孵育4天。弃去24小时内 死亡胚。 (3)收获剩下的活胚及死胚的尿囊液。系列稀释后,测 定血凝价,如结果阳性,可进行血凝抑制试验(HI),确定血凝 素(HA)及神经氨酸酶(NA)亚型。
(4)初代尿囊液血凝试验如结果为阴性,需再传一代。 取收获的尿囊液1: 10稀释,接种0。 3毫升。然后再测血凝 价,结果为阴性时则可判定为禽流感阴性;为阳性时还须作进 一步的鉴定试验。 以上3种缓冲液可选择使用。
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