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怎么诊断鸽子禽流感?

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怎么诊断鸽子禽流感?

怎么诊断鸽子禽流感?

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  • 2018-03-10 18:28:44
      诊断:可根据本病的发生、症状与病变做出初步诊断。红细胞凝集试验与凝集抑制试验、琼脂扩散试验都是诊断手段之一。但只有分离到病原才能确诊。1。病毒分离与培养(1)病料采集与处理应用无菌方法,采取病死鸽脑、肝、脾组织器官,将病料磨细,加人灭菌生理盐水,制成1:5-10的悬液,经3000转/分离心30分钟后静置片刻,吸取上清液,按每毫升加人青霉素、链霉素各1000单位,混匀后置于4T-8丈冰箱中作用2-4小时,或37T温箱中作用30分钟。
      取少许液体,分别接种于鲜血琼脂培养基和厌氧肉汤培养基,于37丈培养观察48小时,应无菌生长,作为病毒分离材料。(2)鸡胚接种用4-6枚11日龄SPF、鸡胚,或4-6枚11日龄未经禽流感免疫鸡群的鸡胚,每胚绒尿腔接种上述病毒分离材料0。2毫升。
      接种18小时后每天照蛋4次,连续4天。通常于接种后24-48小时死亡,18小时内死亡鸡胚废弃,18小时后死亡鸡胚放置于4T冰箱,气室向上,冷却4-12小时。用无菌手续收获绒尿液,并做无菌检查。将清朗、无菌生长和鸡胚病变典型的绒尿液放置低温冰箱冻结保存供进一步鉴定。
      2。病毒鉴定(1)血凝试验在微量凝集板上,从第一孔起,在若干孔内,用定量针头每孔加入0。025毫升生理盐水。用定量针头吸取0。025毫升等量被检的鸡胚绒尿液加入第一孔,依次做倍量稀释,至最后一个量孔弃去余液。再用定量针头每孔加入0。025毫升1%鸡红细胞悬液,并用生理盐水代替被检鸡胚绒尿液的红细胞对照孔,立即在微量振荡器上混匀,置室温下30分钟左右判定结果。
      凡能使鸡红细胞完全凝集的被检病毒液最高稀释倍数,称为1个血凝单位。(2)血凝抑制试验在微量凝集板上,根据标准HA亚型抗血清的种类和效价数排,均从第一孔起,用定量针头在每孔加人0。025毫升生理盐水。在第一孔中分别加人已知抗血清0。025毫升,并依次做倍量稀释至最后一孔弃去余液。
      每孔加人含有4个凝集单位0。025毫升被检病毒液。微量板在微量振荡器上混匀,置37T温箱中作用30分钟后,用定量针头每孔加人0。025毫升1%鸡红细胞悬液,并设被检病毒液和鸡红细胞对照孔,在微量振荡器上混勻,置室温中30分钟左右判定结果。如被某个HA亚型抗血清所抑制,即可将被检病毒液定为该亚型。
      (3)致病性检查取1:10稀释的尿囊液0。2毫升,静脉接种于8只4-8周龄的易感鸡。隔离伺养,10天内死亡6只或6只以上,可确定为高致病力毒株。如死亡在5只或5只以下,则需根据亚型测定结果,有无形成CPE或蚀斑能力,甚至分析其HA多肽氨基酸序列后,方可确定是高致病性、低致病性或非致病性毒株。
      3。血清学诊断(1)琼脂扩散试验用于对禽流感病毒的检查。所有AIV亚型均具有型特异性共同抗原,该种抗原的保守性很强,基本不产生变异。(2)血凝和血凝抑制试验该方法可证实流感病毒的血凝活性及排除新城疫病毒。因此试验可以分别确定HA、NA亚型。(3)中和试验以中和试验来鉴定或滴定流感病毒时,常用鸡胚或组织培养细胞。
      (4)免疫荧光技术最早用于鉴定和定位流感病毒感染细胞中特异性抗原,主要是NP或MP抗原。用NP抗原的荧光抗体染色主要出现核内荧光;用MP抗原的荧光抗体染色主要出现胞质荧光。(5)ELISA技术ELISA具有较高的敏感性,既可以检测抗体,也可以检测抗原,尤其适合于大批样品的血清学调查,可以标准化,而且结果易于分析。
      用于流感的控制、扑灭、检疫。

    i***

    2018-03-10 18:28:44

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