APX 1。 酶液制备 取1。0g植物叶片剪碎，按1∶3（W/V）加入预冷的50mmol/L K2HPO4-KH2PO4缓冲液进行研磨提取，用2层纱布过滤，滤液离心（4000×g）10min，上清液作酶粗提液供测定。 2。 酶活性测定 3ml反应混合液中含50mmol/L K2HPO4-KH2PO4缓冲液（pH7。
0），0。1mmol/L EDTA-Na2，0。3mmol/L AsA，0。06mmol/L H2O2和0。1ml酶液。加入H2O2后立即在20℃下测定10～30秒内的A290变化，计算单位时间内AsA减少量及酶活性。 抗坏血酸过氧化物酶（ascorbate peroxidase，APX，EC 1。
11。1。11） 参考Jiang和Zhang（2001，2002）的方法，取约0。2克材料置液氮中研磨成粉。6mL提取液（50 mmol L-1 Na2HPO4-NaH2PO4缓冲溶液pH 7。0，1 mmol L-1 EDTA，1 mmol L-1 抗坏血酸（AsA）（保持酶的稳定），1％（W/V）不溶性聚乙烯吡咯烷酮）中研磨成匀浆。
匀浆经4℃，12000×g条件下离心6分钟，取上清液在4℃，26900×g条件下再离心15分钟。取上清液进行酶活性测定。或液氮冷却后存于－80℃。 参照Nakano和Asada（1981），Knorzer等（1996）的方法，利用APX在H2O2存在的条件下使抗坏血酸量减少的原理测定酶活性。
测定酶活性时，取约含50 μg蛋白的酶提取液加入1 mL酶反应液（50mmolL-1 Na2HPO4-NaH2PO4缓冲溶液，pH 7。0，含1 mmol L-1 抗坏血酸和2。5 mmol L-1 H2O2）中，充分混匀。紫外－可见分光光度计上读取290 nm处吸光光度值在3分钟内每15秒中的变化。
计算每分钟内每毫克蛋白转化的抗坏血酸量(摩尔消光系数为2。8 L mmol-1cm-1)，用以表示酶活性的大小，单位为μmol AsA min-1 mg-1蛋白。 1。 酶液制备 取1。0g植物叶片剪碎，按1∶3（W/V）加入预冷的50mmol/L K2HPO4-KH2PO4缓冲液进行研磨提取，用2层纱布过滤，滤液离心（4000×g）10min，上清液作酶粗提液供测定。
2。 酶活性测定 3ml反应混合液中含50mmol/L K2HPO4-KH2PO4缓冲液（pH7。0），0。1mmol/L EDTA-Na2，0。3mmol/L AsA，0。06mmol/L H2O2和0。1ml酶液。加入H2O2后立即在20℃下测定10～30秒内的A290变化，计算单位时间内AsA减少量及酶活性。
谢谢。
答：过期和变质肉中会因为生物污染，造成细菌多；脂肪的氧化产生有害于身体的过氧化物详情>>
