表皮细胞和成纤维细胞培养中的关键问题是如何分离获得纯 度高的细胞，一般使用的分离方法是消化分离法。所有组织中都_ 含有一定量的细胞间质（基质、纤维等)，这些细胞间质可以妨 碍细胞生长，用酶消化后，能除去间质，使组织疏松，细胞相互 分离，易于制备细胞悬液。
根据组织不同可选用各种不同的酶， 多用胰蛋白酶或胶原酶，也常选用中性蛋白酶。 皮肤表皮细胞和成纤维细胞分离方法：获得皮肤组织后将皮 下组织剔除干净，用眼科剪把组织剪成2〜3mm大小的块，然后 真皮面朝下贴附于培养皿中，将含有胰蛋白酶和中性蛋白酶的消 化液注入培养皿中，4度消化24小时，将皮片取出用Hanks液清 洗后，将表皮和真皮自基底层分离，而后将表皮和真皮分别用含 胶原酶的消化液继续室温或37度消化2~ 3小时，用80目细胞滤 网将细胞悬液过滤，用Hanks反复清洗，将残留于细胞悬液中的 胶原酶洗净，然后通过Fidll进行密度梯度离心，可以获得基本 纯净的表皮细胞或成纤维细胞。
表皮细胞或成纤维细胞的鉴定：表皮细胞的膜表面有MHC II类抗原的表达，经荧光抗体染色后，可以利用流式细胞技术对 表皮细胞进行检测。成纤维细胞的胞体较大，多呈扁平或梭形， 胞质嗜碱性，胞核较大，椭圆形，染色质疏松着色浅，核仁明 显，利用组织学方法即可对其进行检测。
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