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如何观察细胞凋亡的形态?

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如何观察细胞凋亡的形态?

如何观察细胞凋亡的形态?

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    2018-04-10 04:31:05
  •   1、普通光学显微镜观察2、透射电子显微镜观察3、荧光显微镜观察普通光镜下观察1)用苏木素-伊红(HE)染色:细胞核固缩碎裂、呈蓝黑色、胞浆呈淡红色(凋亡细胞),正常细胞核呈均匀淡蓝色或蓝色,坏死细胞核呈很淡的蓝色或蓝色消失2)Giemsa染色法、瑞氏染色法等,正常细胞核的色泽均一,凋亡细胞染色变深,坏死细胞染色浅或没染上颜色直接用倒置显微镜观察1)细胞体积变小,全面皱缩;2)凋亡小体为数个圆形小体围绕在细胞周围。
      透射电子显微镜观察凋亡细胞体积变小,细胞质浓缩。细胞凋亡过程中细胞核染色质的形态学改变分为三期:Ⅰ期的细胞核呈波纹状或呈折缝样,部分染色质出现浓缩状态;Ⅱa期细胞核的染色质高度凝聚、边缘化;Ⅱb期的细胞核裂解为碎块,产生凋亡小体。荧光显微镜常用的荧光染料:丫啶橙、PI、DAPI、Hoechst33258和Hoechst33342、EB等Hoechst33342、Hoechst33258、DAPI三种染料与DNA的结合是非嵌入式的,主要结合在DNA的A-T碱基区。
      紫外光激发时发射明亮的蓝色荧光。1)PI双染色法基本原理Hoechst是与DNA特异结合的活性染料,能进入正常细胞膜而对细胞没有太大得细胞毒作用。Hoechst33342在凋亡细胞中的荧光强度要比正常细胞中要高。DAPI为半通透性,用于常规固定细胞的染色。
      碘化丙啶(PI)是一种核酸染料,它不能透过完整的细胞膜,但在凋亡中晚期的细胞和死细胞,PI能够透过细胞膜而将细胞核染红。因此将Annexin-V与PI匹配使用,就可以将凋亡早晚期的细胞以及死细胞区分开来。注意事项细胞凋亡时,其DNA可染性降低被认为是凋亡细胞的标志之一,但这种DNA可染性降低也可能是因为DNA含量的降低,或者是因为DNA结构的改变使其与染料结合的能力发生改变所致。
      在分析结果时应该注意。

    失***

    2018-04-10 04:31:05

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