湿热灭菌有煮沸消毒、流通蒸汽灭菌和高压蒸汽灭菌等几种。及其操作是需要注意内容如下：
（1）煮沸消毒法，此法操作简便、经济、实用且效果可靠，是最常用的消毒方法之一。将待消毒的物品置于一定容器中煮沸(100℃)后20分钟左右，即可达到消灭所有病原体的目的。
  适用于一切器械如玻璃器皿、金属器械、工作服、帽等物品的消毒。如在水中加入2%碳酸钠，可增强杀菌作用，同时还可减缓金属氧化，若在水中加入2%~5%石炭酸，煮沸5分钟可杀死细菌的芽孢。对不耐热的物品，在水中加入0。2%甲醛或0。01%升汞，80℃维持60分钟，也可达到灭菌的目的。
  
煮沸消毒时，消毒时间应从水沸腾后算起；煮沸过程中不要加人新的消毒物品；消毒物品应保持清洁，消毒前可做清洗；一定要将消毒部位浸入水中；消毒注射器时，针筒、针芯、针头有套叠或一端开口的物品都应拆开分放；煮沸消毒棉织物时，应适当搅拌;海拔较高地区，水的沸点低于l00℃，为缩短煮沸时间，可在水中加人增效剂以提高消毒效果。
  
（2）流通蒸汽灭菌法又称为常压蒸汽灭菌法，是在1个标准大气压下，利用特制的流通蒸汽灭菌器或蒸笼生成100℃左右的水蒸气进行消毒。这种消毒方法常用于不耐高温高压物品的消毒。流通蒸汽消毒时，消毒物品包装不宜过大、过紧，吸水物品不要浸湿后放入。
  消毒时间应从水沸腾后有蒸汽冒出时算起，维持消毒30分钟，能杀死细菌的繁殖体，但不能杀死细菌的芽孢和霉菌孢子。所以，有必要采用间歇灭菌法。即将蒸汽灭菌器或蒸笼加热约100C维持30分钟，将消毒物品置于室温下，每天进行1次，连续3天，这样所有的芽孢将被杀灭。
  应用间歇灭菌法，在间歇期必须提供芽孢发芽所需的条件，对不具备芽孢发芽条件的物品，则不能用此法灭菌。
（3）高压蒸汽灭菌法利用高压蒸汽灭菌器进行高温高压灭菌，是效果最好的湿热灭菌法。通常压力达到1×105帕时，温度为121。3℃，经过30分钟即可杀灭所有的繁殖体和芽孢。
  此法常用于耐髙热的物品，如普通培养基、玻璃器皿、金属器械、橡胶用品、生理盐水、纱布、针具等的灭菌。注意严格按照高压蒸汽灭菌器的使用说明进行操作。