交错切就是限制性内切酶在DNA双链的不同位置切割DNA，产生的DNA片段的末端不是平齐的，就产生粘性末端。被限制性内切酶切断的DNA分子片段，需要一种特殊的酶——DNA连接酶来缝合，恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键。E·coliDNA连接酶只能将双链DNA片段互补的黏性末端之间连接起来，不能将双链DNA片段平末端之间进行连接。提高平末端连接效率的措施：①提高T4DNA连接酶的浓度；②提高DNA片段的浓度；③降低ATP浓度，以增强连接物与DNA结合；④加入多胺化合物，如亚精胺，降低DNA的静电排斥力；⑤加浓缩剂，如大分子排阻物聚乙二醇（PEG）、强水化物三氯化六氨钴等。
T4DNA连接酶可以连接平末端 但是平末端相对来说连接效果没有粘性末端好 如果两个平末端是用同种限制酶切割 也就是核苷酸序列反向对称 连接的效果好一些 如果两个平末端不一样 接就是核苷酸序列不反向对称 不太可能连接上
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