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生物酶的高效液相色谱分离方法?

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生物酶的高效液相色谱分离方法?

生物酶的高效液相色谱分离方法

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  • 2013-11-22 11:22:17
    1.气相:气相色谱是一种物理的分离方法。利用被测物质各组分在不同两相间分配系数(溶解度)的微小差异,当两相作相对运动时,这些物质在两相间进行反复多次的分配,使原来只有微小的性质差异产生很大的效果

    荥***

    2013-11-22 11:22:17

  • 2013-11-22 11:15:55
      高效液相色谱法分为:液-固色谱法、液-液色谱法、离子交换色谱法、凝胶色谱法。
    1。液-固色谱法(液-固吸附色谱法)
    固定相是固体吸附剂,它是根据物质在固定相上的吸附作用不同来进行分配的。
    ①液-固色谱法的作用机制
    吸附剂:一些多孔的固体颗粒物质,其表面常存在分散的吸附中心点。
         流动相中的溶质分子X(液相)被流动相S带入色谱柱后,在随载液流动的过程中,发生如下交换反应:   X(液相)+nS(吸附)X(吸附)+nS(液相)   其作用机制是溶质分子X(液相)和溶剂分子S(液相)对吸附剂活性表面的竞争吸附。
         吸附反应的平衡常数K为:   K值较小:溶剂分子吸附力很强,被吸附的溶质分子很少,先流出色谱柱。   K值较大:表示该组分分子的吸附能力较强,后流出色谱柱。   发生在吸附剂表面上的吸附-解吸平衡,就是液-固色谱分离的基础。 ②液-固色谱法的吸附剂和流动相 常用的液-固色谱吸附剂:薄膜型硅胶、全多孔型硅胶、薄膜型氧化铝、全多孔型氧化铝、分子筛、聚酰胺等。
       一般规律:对于固定相而言,非极性分子与极性吸附剂(如硅胶、氧化铜)之间的作用力很弱,分配比k较小,保留时间较短;但极性分子与极性吸附剂之间的作用力很强,分配比k大,保留时间长。 对流动相的基本要求:   试样要能够溶于流动相中   流动相粘度较小   流动相不能影响试样的检测 常用的流动相:甲醇、乙醚、苯、乙腈、乙酸乙酯、吡啶等。
       ③液-固色谱法的应用 常用于分离极性不同的化合物、含有不同类型或不;数量官能团的有机化合物,以及有机化合物的不同的异构体;但液-固色谱法不宜用于分离同系物,因为液-固色谱对不同相对分子质量的同系物选择性不高。 2。液-液色谱法(液-液分配色谱法) 将液体固定液涂渍在担体上作为固定相。
       ①液-液色谱法的作用机制 溶质在两相间进行分配时,在固定液中溶解度较小的组分较难进入固定液,在色谱柱中向前迁移速度较快;在固定液中溶解度较大的组分容易进入固定液,在色谱柱中向前迁移速度较慢,从而达到分离的目的。 液-液色谱法与液-液萃取法的基本原理相同,均服从分配定律:K=C固/C液 K值大的组分,保留时间长,后流出色谱柱。
      

    -***

    2013-11-22 11:15:55

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