表达梭菌acetobutylicum丁醇合成 基因在大肠杆菌中的表达 摘要重组丁醇通路组成 梭状芽孢杆菌的基因acetobutylicum ATCC 824 ， thiL ，羟丁酸， CRT显示器，声BCD - etfB - etfA ，并adhe1 （或粘附）编码乙酰- 辅酶A乙酰转移酶（ THL ） ， β - hydroxybutyryl辅酶A脱氢酶 （羟丁酸） ， 3 hydroxybutyryl辅酶A脱氢酶 （阴极射线管） ，丁酰基辅酶A脱氢酶（声BCD ） ，丁醛 脱氢酶（ BYDH ）和丁醇脱氢酶 （ BDH ） ，在启动子控制的交建 并引入大肠杆菌。
功能 这六个表达酶证明表明 相应的酶活性使用分光， 高效液相色谱法和 气相色谱分析。碱性催化分解活性， 没有发现在大肠杆菌中以前，结果表明在 本研究通过执行程序，从细胞中提取 活动准备在厌氧条件下测量。 此外， etfA和etfB共同表达 发现是必不可少的声BCD活动。
在案件 BYDH活动，粘附基因产物被证明有 更高的特异性对丁酰辅酶A相比， adhe1产品。丁醇生产葡萄糖 实现了高度集中的细胞butanologenic 大肠杆菌菌株， BUT1与adhe1和BUT2与 粘附，在厌氧条件下，和BUT1和BUT2 株均表现生产400和16毫米的正丁醇 6 - 1毫米丁酸作为副产品分别。
这个 研究报告小说丁醇生产的需氧 拥有pregrown微生物的基因 严格厌氧菌，产气荚膜acetobutylicum 。 关键词丁醇的生产。 梭菌acetobutylicum 。大肠杆菌。生物燃料 导言 “生物燃料”生产的可再生资源正吸引 越来越多的重视，公众关注 全球变暖和能源安全已被越来越多 世界各地。
在生物燃料，目前正丁醇 聚光灯由于其优势，以此作为新的一代 生物燃料的乙醇，因为它包含更多的能量（ 1。5倍 更大的体积能量比乙醇） ，少 腐蚀性和较少的水溶性，并更容易地融为一体， 汽油或柴油燃料。 微生物丁醇生产首先报道了 路易斯巴斯德于1861年，是工业化使用 梭菌acetobutylicum分离哈伊姆魏兹曼 在20世纪初。
细菌生产丁醇/ 丙酮/乙醇的比例从6点03分01秒糖和淀粉 （米切尔1998年） ，整个过程被称为丙酮，丁醇， 和乙醇（阿部）发酵。这一进程仍然 是的基础，目前的生物丁醇 生产过程。 细菌研究了正丁醇的生产日期进行 完全由成员属梭状芽孢杆菌， 这是已知含有阿发酵和丁醇， 异丙醇，乙醇fermentationmicroorganisms和包括 角acetobutylicum ，角beijerinckii ，角saccharoperbutylacetonicum ， 角saccharoacetobutylicum ，角aurantibutyricum ，角 巴氏，角芽孢杆菌，角cadaveris ，和C。
tetanomorphum （乔治等人。 1983年;哥特瓦尔德等。 1984年; Keis等 基地。 1995年） 。这些丁醇生产者，整个基因组序列 序列的角acetobutylicum ATCC 824TS （ Nölling等。
2001)和 ijerinckiiNCIMB8052(国立生物技术信息中心加入应用微生物生物工程（ 2008 ） 77:1305-1316 内政部10。1007/s00253-007-1257-5 尽管长期研究历史进入阿发酵 过程中，今天仍然存在的障碍。
首先，产气荚膜 严格厌氧菌的生长条件必须保持 厌氧，增长率相比明显放缓 许多好氧微生物造成 丁醇产率低。要解决这些问题， 好氧微生物快速增长率可 利用;但是，一直没有这样的报告 微生物能够生产丁醇。其次， 丁醇生产已证明需要改变 培养条件。
醋酸丁酯过程中产生 生长阶段的文化pH值降低和酸性条件下 在固定相被广泛视为引发的转变 在代谢造成溶剂生产（琼斯和 老虎伍兹1986年） 。另一个因素表明触发丁醇 生产是调节蛋白Spo0A ，这是 负责孢以及诱导基因 参与丁醇生产（布朗等人。
1994年; Ravagnani 等。 2000年） 。这些结果意味着，发酵 进程应是紧紧管制，以最大限度地溶剂 生产。最后，有一些报告 损失角acetobutylicum的能力，生产溶剂。这个 变性被认为是由于丧失megaplasmid ， pSOL1 ，该基因的需要solventogenesis （ Cornillot等。
1997年） ，这一现象是 的因素造成的不稳定solventogenesis期间 发酵过程的阿。由于消极方面 如上所述，发展一种新型的生产丁醇 微生物和生产过程的预期。 生产的丁醇或代谢途径 通路由乙酰辅酶A ，以正丁醇梭状芽孢杆菌属中。
说明了图。 1 ，涉及以下酶： 乙酰辅酶A乙酰转移酶（硫解酶; THL ） ， β - hydroxybutyryl - 辅酶A脱氢酶（脱氢酶） ， 3 hydroxybutyryl辅酶A 脱水（ crotonase ; CRT显示器） ，丁酰基辅酶A脱氢酶 （声BCD ） ，醛脱氢酶（ BYDH ）和正丁醇 脱氢酶（ BDH ;琼斯和老虎伍兹1986年） 。
该BYDH 和BDH反应中的梭状芽孢杆菌属。是催化 的双功能酶和酶编码adhe1 和粘附（ Nölling等。 2001年） 。在基因的角 acetobutylicum ATCC 824参与丁醇生产， 羟丁酸， CRT显示器，并声BCD编码基因已被克隆 在大肠杆菌中的表达及其活动进行了测量 之后，越来越多的微生物在有氧或 厌氧条件。
虽然羟丁酸和CRT活动 测定，声BCD活动未检出（博因顿等 基地。 1996年） 。优势利用大肠杆菌作为东道国微生物 在丁醇生产过程可能包括 大量信息可在其遗传和 生理特点和现有的各种 遗传工具进行东道国修改。使用 提供信息和工具，东道国可以修改 更适合于生产过程中的正丁醇 增加其耐受丁醇和尽量减少 副产物的形成。
在目前的纸张，表达的5个基因编码 的酶参与六个步骤由乙酰辅酶A 以正丁醇在大肠杆菌中的表达及其活性测定 报告。此外，丁醇生产的大肠杆菌 大肠杆菌株的基因拥有参与丁醇 生产证明。
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