《刺客信条2》的背景设定在1486年的意大利文艺复兴时代，地点在威尼斯，佛罗伦萨以及托斯卡纳。玩家依旧是操作Desmond的祖先，Desmond的戏份将会比原著有所增加，本次的祖先名叫Ezio AutitoredaFirenze。Ezio出身贵族，但是没多久他就被卷入了他人对他家族的阴谋中，于是他决定找阴谋策划者复仇。
在Ezio的任务中，他将要面对强盛的Grimaldi家族，这个家族也就相称于今天黑手党的前身。除了要对抗Grimaldi家族的成员，我们知道圣殿骑士团也会回来。作为敌方重要角色的Carno Grimaldi，在威尼斯当地可谓有权有势。
与一代之间的关连：
《刺客信条2》是一代的续集。
现代部分的剧情直接接续一代的尾声，但Animus（译注：一代的DNA记忆提取机）会把你拉进一个新颖而迥异的历史时代。整体上，我们奠基于前作的长处，例如独特的自由度与融入感等，再加以延伸，并在核心玩法（gameplay）上加入更多的深度、变化以及广度。
剧情方面，Ezio是Altair的后裔，一代与二代之间的关连会透过一本密码书解开，类似达芬奇（Leonardo Da Vinci）闻名的手稿。
新主角及新技能：
阿萨辛修会还存活着；虽然教条亘古不变，但成员会随着时间变动。
乍看之下，Ezio只是个文艺复兴时期的贵族，但阿萨辛的血液在他体内流动。他和Altair一样，神秘而天赋出众；他的情绪收放自如，精通杀人技艺。不过Ezio同时也有属于自己的过去：他彬彬有礼，在社会各阶层人士间来去自如。既然他是义大利人，我们也让他对女人有份特别的。
。。热爱：他是个诱惑者。最重要的是，Ezio最初的任务由复仇驱使，决心一报家破人亡之仇。为心爱之人复仇的高贵情操，带领他踏上未知的旅途，并且面临比个人私仇与正义之旅更庞大的事物。。。。
Ezio在各领域都有新的技能──包括探索世界、隐藏行踪，还有战斗与刺杀。
在探索方面，主角能适应二代的新环境。既然游戏有好一段内容都发生在威尼斯，Ezio能够跳水跟游泳。他还可以登上威尼斯的平底船（gondola），还能划船！这些新技能有机会在各种任务中派上用场。在市区里自由奔跑的感觉比起以前更有趣、更流畅。有了新的能力和很酷的招式，让攀爬建筑的过程能保持新奇感以及挑战性。
举例来说，新的「攀跳（ClimbLeap）」动作让玩家能在攀爬垂直建筑时，再朝上飞跃数公尺，移动到原本无法抵达的高处。
Ezio也能混进人群里的任何群众（group）之中，让探索的过程更有趣，也更写实。玩家可以移动到群众里，再从不同的集团中交错移动，在城市中漫游。
群众是《刺客信条》的核心要素，在二代里也是；玩家能感觉到每个NPC都是一个机会。玩家不仅可以混入任何的群众，还能操纵某些群众，命令他们为你行事！
许多新技能与战斗系统有关──新招式的细节先不谈，光是Ezio能使用的新武器种类就很多了：长矛，斧头，战锤，这还只是一部分而已。
由于这些都是重武器，Ezio不必随身携带：他现在可以卸掉敌人的武器，以其人之兵器还治其人之身。他的徒手攻击也更厉害了，有各种拳、脚、抓技、头锤跟非凡摔技。。。抓住敌人的领子再赏他一记头槌，感觉很畅快。。。假如你和Ezio一样复仇心切的话。
一把袖里剑（hiddenblade）很有趣，但两把更棒。
这一次，Ezio双手各有一把袖里剑。想像一下两把袖里剑能给刺杀、反击与招式升级带来多少新的变化。我最喜欢的是双杀，让人有种强大的优越感。最后，我们新增了很多刺杀的动作。你从城市的任何一个角落几乎都能突袭敌人：屋顶、藏身处、水中、高台。
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