用于兰花组织培养的外植体可以是芽、叶片或茎段等。正 在生长中的芽是较好的培养采集物；也可以选择无病虫害的植 株作为取材母株，剪切所需叶片与茎段（长2〜3厘米）；注意 采集的材料要是一年生的，裁下的枝条至少要有一个节，采集 时要从节间剪切，培养后从节处长芽，愈伤组织从切口处生长。
   不同种类的兰花采集芽的大小有所不同，如虎头兰采3〜8厘米、 卡特兰采6~8厘米、国兰采2~3厘米,单轴类的兰花（如万带兰、 树兰等）应从顶尖上采集一段，取其生长点部位。切取下来的芽或茎段，放在自来水下冲洗干净，并将最外 面的1~2片荀叶或老叶去掉。
  再将材料倒于1000毫升烧杯中， 倒入500~800毫升自来水，加1~5滴吐温（Tween) 40,用玻璃 棒搅拌数分钟后，倒去含吐温40的水，换上清水后再搅拌，连 洗3次即可。将上述清洗干净的材料浸没在10%次氯酸钠溶液 或含3%有效氯的漂白粉清液中，火菌10〜15分钟（灭菌时间 和灭菌液的浓度应根据芽或茎段的大小及不同种类进行适当调 整，做到既能防止菌类的污染，又可避免因灭菌液的杀伤作用 而引起组织坏死)。
  然后移至无菌条件下，用无菌水将灭过菌的 材料连洗3次，待用。如果上述灭菌方法未能达到灭菌的目的， 可采用二次灭菌法：即先将材料放入70%酒精中浸泡30秒，再 将材料移入0。1%升汞中灭菌3〜10分钟，取出后用无菌水冲洗 3~4次，然后再按上述常规灭菌方法灭菌1次，即能达到目的。
  将灭菌后的外植体放在培养皿中，在无菌条件下进行剥离和 切割，切成所需大小，用镊子将剥出的组织直接接种在培养瓶 的培养基上（在瓶上做好标记)，然后移到培养室。卡特兰类容 易产生褐变，在进行切割时可将芽放在无菌水中操作，这样会 比在空气中操作产生褐变的机会少些。
  如果担心母株材料本身 带菌，则可在培养基内加入少量抗生素（如橄榄霉素20毫克/升、氨苄西林50毫克/升与适量制霉菌素等)，以便抑制细菌与 霉菌的生长。在含抗生素的培养基上经多次继代培养，可使植 物组织无菌化，达到无菌苗的标准。