用电脑怎么恢复微信删除的聊天记录

答：rtpcr操作有5个步骤。具体操作如下：1、总RNA提取。DEPC处理水溶解RNA，-20℃保存，备反转录之用。2、反转录。按下列组成调制反应液：样品总RNA1μg；随机引物或oligo­-dT(18-20)100pmol；脱氧核苷三磷酸(每种dNTP各l0mmol／L)1μl；反转录缓冲液(5×)4μl；RNase抑制剂(20~40U／μl)1μl；M-MLV反转录酶20U；DEPC处理水补至20μl；阴性对照用DEPC处理水代替RNA模板，其余成分相同。将上述反应成分加于0.5ml的EP管中，混匀，短时离心。将各反应管放入PCR扩增仪上，37℃60min，70℃变性15min，反转录产物于4℃保存备用。3、PCR扩增。按下列组成调制反应液：TaqDNA聚合酶1.0U；cDNA模板1.0μl；引物一对(各10pmol／μl)1.0μl；脱氧核苷三磷酸(每种dNTP各2.5mmol／L)2.0μl；PCR缓冲液(10×，含MgCl2)2.5μl；双蒸水补至25.0μl。以反转录阴性对照取代cDNA模板作为PCR阴性对照，将上述反应成分加于0.2mlPCR管中，短暂离心，混匀。将各PCR反应管放入DNA扩增仪，94℃5min，然后按以下条件进行热循环：94℃45s、56℃30s、72℃30s，循环30次，最后72℃延伸10min。4、1％-2％琼脂糖凝胶电泳法检测RT-PCR产物。取PCR产物8μl与上样缓冲液2μl混合上样，适当大小的DNAMarker一起电泳分离，溴乙锭染色。5、结果讨论：如与预期大小一致，且空白对照管中无扩增条带，说明本实验获得的条带与预期靶片段大小相符。