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抗坏血酸含量测定试剂盒操作说明书

时间:2022-09-08 02:49:16 其他合同

注意:正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

产品内容:

提取液:液体120ml×1 瓶,4℃保存; 试剂一:液体6ml×1瓶,4℃保存; 试剂二:液体5ml×1瓶,4℃保存; 试剂三:液体6ml×1 瓶,4℃保存;

标准品:粉剂10mg×1 瓶(避光),4℃保存。(称取1mg加入10ml提取液,即为100μg/ml标准品)

试验中所需的仪器和试剂:

研钵、冰、低温离心机、可见分光光度计、1ml玻璃比色皿、可调式移液器和蒸馏水。

产品说明:

AsA。AsA是辅酶、自由基清除剂、电子共体/受体和草酸盐与酒石酸盐生物合成的底物等。作为植物细胞中最重要的抗氧化剂,AsA在保护叶绿体免于氧化损伤起着举足轻重的作用, 也是衡量农作物产品品质的重要指标之一。

抗坏血酸具有较强还原能力将Fe3+还原成Fe2+,邻二氮菲与Fe2+会形成红色螯合物,在534nm处具

有强的吸收法,且吸光值与反应液中抗坏血酸含量呈正比。

操作步骤:

一、样品的前处理:

(1)组织:按照组织质量(g):提取液体积(ml)为 1:5~10的比例(建议称取约 组织, 加入1ml提取液)进行冰浴匀浆。8000g,4℃离心 20min,取上清置冰上待测。

(2)细菌、真菌:按照细胞数量(10个):提取液体积(ul)为500~1000:1 的比例(建议500 万细胞加入1ml提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);8000g,4℃离心 20min,取上清液置冰上混匀待测。

(3)血清等液体:按照样本体积(g):提取液体积(ml)为 1:5~10 的比例(建议称取约 样本,加入1ml提取液)进行混匀。8000g,4℃离心 20min,取上清置冰上待测。

二、测定操作表:

标准曲线的绘制及样本测定(按顺序加入下列试剂)

0μg/ml

15μg/ml

30μg/ml

60μg/ml

80μg/ml

100μg/ml

测定管

标准品(μl)

0

6

12

24

32

40

0

样本(μl)

0

0

0

0

0

0

40

提取液(μl)

40

34

28

16

8

0

0

试剂一(μl)

50

50

50

50

50

50

50

混合、摇匀

试剂二(μl)

25

25

25

25

25

25

25

试剂三(μl)

50

50

50

50

50

50

50

蒸馏水(μl)

50

50

50

50

50

50

50

充分混匀,室温静置 15min后,534nm处测定各管吸光值。如底部有沉淀,离心后再读数三、抗坏血酸含量计算

根据标准曲线,将样品△A带入公式中(x),计算出样品浓度 y(μg/mL)。按蛋白浓度计算

抗坏血酸(μg / mg prot)=y×V样÷(V样×Cpr) 按样本鲜重计算

抗坏血酸(μg /g 鲜重)= y×V样÷(V样÷V样总×W) 按细胞数量计算

抗坏血酸(μg /106cell)= y×V样÷(V样÷V样总×细胞数量) 按体积计算

抗坏血酸(μg /ml)=10y

V 样总:上清液总体积,mL;V 样:加入反应体系中上清液体积;W:样品质量,g;Cpr:上清液蛋白质浓度,mg/mL;细胞数量:以 106 为单位计量;T:样本稀释倍数。

注意事项:

1、样品处理需匀浆完全,抗坏血酸易分解,需避光保存

2、标准品:现配现用。

3、若不确定样品中 抗坏血酸 含量的高低,可稀释几个梯度后再进行测量。

4、因为提取液中含有蛋白质沉淀剂,因此上清液不能用于蛋白浓度测定。

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