最直接的就是切胶测序。
第二个就是设计nested PCR的引物提高扩增特异性；另外要看你有没有positive control，亮的话说明你要扩增的那段有问题；不亮的话说明你PCR有问题；negative control也能说明些问题比方说你那个不亮的条带有可能是primer dimer．．．。
你好,很高兴为您解答。
引物设计不合适：选择的扩增序列与非目的扩增序列有同源性，因而在进行PCR扩增时，扩增出的PCR产物为非目的性的序列。靶序列太短或引物太短，容易出现假阳性。需重新设计引物。
答：这个基于你的片段中的酶切位点，如果你的片段中含有和载体中位点一致的序列，那你就不能取这个位点，因为酶切时会把你的片段切开，可以选你的片段中没有的位点，设计引物详情>>
